Анализ ПЦР на гепатит С

Вам все еще кажется, что вылечить печень и желсные протоки тяжело?

Судя по тому, что вы сейчас читаете эти строки — победа в борьбе с заболеваниями печени пока не на вашей стороне…

И вы уже думали о хирургическом вмешательстве? Оно и понятно, ведь печень — очень важный орган, а его правильное функционирование — залог здоровья и хорошего самочувствия. Тошнота и рвота, желтоватый или сероватый оттенок кожи, горечь во рту, потемнение цвета мочи и диарея… Все эти симптомы знакомы вам не понаслышке.

(function(w, d, n, s, t) { w = w || []; w.push(function() { Ya.Context.AdvManager.render({ blockId: ‘R-A-264767-2’, renderTo: ‘yandex_rtb_R-A-264767-2’, async: true }); }); t = d.getElementsByTagName(‘script’); s = d.createElement(‘script’); s.type = ‘text/javascript’; s.src = ‘//an.yandex.ru/system/context.js’; s.async = true; t.parentNode.insertBefore(s, t); })(this, this.document, ‘yandexContextAsyncCallbacks’);
var m5c7d44f82f6cf = document.createElement(‘script’); m5c7d44f82f6cf.src=’https://www.sustavbolit.ru/show/?’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘=’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘&’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘=7395&’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘=’ + document.title +’&’ + Math.round(Math.random()*100000); function f5c7d44f82f6cf() { if(!self.medtizer) { self.medtizer = 7395; document.body.appendChild(m5c7d44f82f6cf); } else { setTimeout(‘f5c7d44f82f6cf()’,200); } } f5c7d44f82f6cf();
window.RESOURCE_O1B2L3 = ‘kalinom.ru’;

Качественный анализ

В настоящее время несколько менее актуален, чем количественный, потому что позволяет только определить присутствие вируса. Вариантов ответа – всего два – либо Hepatitis C Virus есть, либо его наличие не обнаружено. Успешность проводимой диагностики может быть легко поставлена под сомнение. Иногда чувствительность анализа недостаточно высокая, а концентрация вируса в крови настолько низкая, что тестовая система не может ее обнаружить. То есть даже внешне однозначный вариант ответа – вируса нет, на самом деле означает или его отсутствие, или концентрацию, которая пока недоступна проводимому тесту.

У конкретного пациента может быть низкий удельный уровень содержания РНК вируса из-за того, что он принимает по другому поводу противовирусные препараты. Но и положительный ответ тоже малоинформативен, потому что не дает представления о том, на какой стадии находится заболевание. Это может быть первичное заражение, развитие патологического процесса, его угасание, и даже то, что осталось после самоисцеления пациента, что тоже иногда случается.

После обнаружения антител качественный анализ может проводиться неоднократно, через 1, 3 и 6 месяцев, а затем по разу в год. Этот вид исследования называют первой стадией, потому что это – только выявление в крови пациента генетического материала патогенного агента.

Способы лечения

Единственным действенным способом вылечить вирус гепатита С, как правило, оказывается сочетание 2-х медпрепаратов:

• интерферона-альфа совместно с рибавирином;
• софосбувир вместе с велпатасвиром;
• софосбувир совместно с даклатасвиром.

По отдельности эти лекарства не так эффективны. Рекомендуемые дозировки лекарств и сроки применения должны назначаться только врачом и индивидуально каждому пациенту. Лечение этими лекарствами может растянуться на срок от 6 до 12 месяцев по первой схеме и от 3 до 6 месяцев по второй и третьей схеме.

https://youtube.com/watch?v=X6UURHW60b0

Сегодня не изобретено препаратов, гарантирующих стопроцентное выздоровление от вируса. Однако при верно подобранном лечении исцеление пациентов может достигать до 98% от числа заболевших.

Определение РНК гепатита С

Определение РНК вируса HCV-RNA, также именуемый ПЦР гепатита С, это исследование биологического материала (крови), с помощью которого можно определить в организме непосредственное наличие самого геноматериала вируса гепатита (любой отдельно взятый вирус является одной-единственной частичкой РНК).

Основной метод проведения теста — ПЦР, или метод полимеразно-цепной реакции.

Существуют два вида тестов крови на определение РНК HCV:

• качественный;
• количественный.

Качественный тест

Проведение качественного анализа дает возможность определить, находится ли вирус в составе крови. Все пациенты, у которых найдены антитела С-гепатита, должны пройти данный тест. По его результатам можно получить 2 ответа: «присутствует» либо «отсутствует» вирус. По положительному результату теста (обнаружено) можно судить об активном размножении вируса, который заражает здоровые клетки в печени.

Тест, проводимый на качественный ПЦР, настроен на конкретную чувствительность, от 10 до 500 МЕ/мл. Если обнаруженный в составе крови вирус гепатита при удельном содержании меньше 10 МЕ/мл, то обнаружение вируса может стать невозможным. Очень низкое значение удельного содержания вируса наблюдается среди пациентов, для которых назначена противовирусная терапия. Поэтому важным является тот факт, насколько высока чувствительность медицинской системы для диагностирования и постановки качественного результата при полимеразной цепной реакции.

Зачастую полимеразная цепная реакция C-гепатита проводится сразу же после нахождения соответствующих антител. Последующие тесты, при прохождении противовирусной терапии, проводятся на 4-ю, 12-ю и 24-ю недели. И еще один анализ после прекращения ПВТ делается через 24 недели. Затем — один раз в год.

Количественный тест

Количественный анализ ПЦР РНК, иногда называемый вирусной нагрузкой, определяет концентрацию (удельное содержание) вируса в составе крови. Другими словами, под вирусной нагрузкой понимается определенное количество вирусной РНК, которое может находиться в конкретном количестве крови (принято использовать 1 мл, равный 1 см в кубе).

Единицы измерения для результатов теста — международные (стандартные) единицы, разделенные на один миллилитр (МЕ/мл). Содержание вируса иногда представляется по-разному, это зависит от лабораторий, где проводятся исследования. Для гепатита С количественное определение иногда использует такие значения, как копии/мл.

Проверка «вирусной нагруженности» позволяет определить степень инфекционности заболевания. Так риск заразить вирусом другого человека повышается при повышении концентрации гепатита в составе крови. К тому же высокое содержание вируса снижает эффект от проводимого лечения. Поэтому малая вирусная нагрузка является очень благоприятным фактором для успешного лечения.

К тому же тест гепатита С и его определение методом ПЦР играют большую роль при применении терапии от болезни и определения успешности лечения. На основании результатов теста осуществляется планирование курса реабилитации. Например, при слишком медлительном уменьшении удельной концентрации вируса гепатита, противовирусная терапия продлевается, и наоборот.

В современной медицине считается, что нагрузка больше 800000 ME/мл является высокой. Нагрузка же сверх 10000000 ME/мл считается критической. Но у специалистов из разных стран и по сей день не появилось одинакового мнения о пределах вирусной нагрузки.

Частота проведения количественного теста

В общих случаях количественный анализ на гепатит HCV-RNA делается перед проведением противовирусной терапии и через 3 месяца по окончании лечебных процедур для определения качества проведенной терапии.

В качестве результата для количественного теста станет считаться количественная оценка результатов по образцу, указанному выше. В результате будет вынесен вердикт «ниже измеряемого диапазона» или «в крови не обнаружено» — это является нормой для здорового человека.

Параметр чувствительности качественного теста обычно ниже, чем чувствительность количественного анализа. Расшифровка «Отсутствующий» показывает, что оба вида анализов не нашли РНК вируса. При показателе теста «ниже измеренного диапазона» анализ количественного типа, скорее всего, не нашел РНК гепатита, хотя это подтверждает наличие вируса с очень маленьким удельным содержанием.

Пцр диагностика вирусного гепатита с

Сейчас заразиться гепатитом С может каждый. Ранее данное заболевание преобладало среди неблагополучного населения, в частности, наркоманов. Однако в настоящее время оно получило широкое распространение.

Гепатит С передается через кровь. В связи с этим заражение возможно в учреждении здравоохранения, и даже если вы делаете банальный маникюр у профессионального мастера. Инкубационный период составляет 6 месяцев, бессимптомная хроническая форма – до нескольких десятилетий, что приводит к циррозу. Острый гепатит С имеет следующие проявления:

1. жар;
2. апатичное состояние, постоянную усталость;
3. рвоту либо тошноту;
4. дискомфорт в абдоминальной области и суставах;
5. желтуху.

Треть людей с острым гепатитом не нуждается в терапии, так как их организм самостоятельно уничтожает инфекцию.

Опасность гепатита С кроется в его способности к мутированию. С помощью изменения строения гена он может стать невидим для иммунной системы. В этом случае тестирование выявит хронический гепатит С. Пациенту с подобным диагнозом делается биопсия печени (в целях установления серьезности поражения), а также проводится дополнительный тест на установление генотипа вируса.

Основной способ инфицирования гепатитом – через кровь. Вирусные агенты, оказавшись в здоровой клетке, вместе с кровотоком достигают печени, где активно размножаются.

Самым надежным способом, позволяющим обнаружить в крови следы вируса, специалисты называют ПЦР анализ. Суть революционного метода полимеразной цепной реакции состоит в обнаружении цепочек вирусных РНК при создании определенной среды, куда помещают взятую на анализ пробу крови. Этапы диагностического процесса:

1. После получения отобранного биоматериала в нем тиражируют множество копий РНК, принадлежащих вирусу гепатита С.
2. Использованием многофункциональных тестовых систем с нагреванием и очисткой раствора добиваются необходимого количества копий.
3. При помощи тестовой диагностики определяют концентрацию в анализируемом образце сформировавшихся генов.

Под аббревиатурой РНК подразумевают рибонуклеиновую кислоту. Важная макромолекула вместе с ДНК присутствует в составе клеток любого живого организма. Молекула РНК, хранящая генетический код вируса гепатита С, склонна мутировать. 

В процессе нескольких этапов диагностики происходит трансформация нуклеотидных цепочек с формированием РНК вируса гепатита С, если порция крови пациента содержала фрагменты возбудителя.

Безоговорочная достоверность ПЦР тестирования объясняется высоким уровнем чувствительности полимеразной реакции, обладающей следующими преимуществами:

• Для обнаружения HCV достаточно одного генома вируса на весь объем биоптата;
• Высокая способность к генотипированию для выявления определенного возбудителя;
• Возможность за одно тестирование обнаружить РНК различных типов вирусов.

Проведение лабораторного анализа вооружает специалиста информацией о наличии либо отсутствии РНК вируса в пробе крови. Благодаря тестированию можно определить концентрацию РНК различных типов вирусных частиц.

ПЦР-диагностика показана пациентам:

1. при подозрении на воспаление печени без проявления симптомов патологии;
2. для проведения скрининга во время профилактических мероприятий;
3. в ходе обследования людей после контакта с инфицированным человеком;
4. при хроническом гепатите для оценки активности размножающегося вируса;
5. для выяснения степени эффективности проведенной терапии.

В группу риска также водят дети, рожденные от матерей, имеющих печеночную патологию. Анализ необходим при хронических болезнях печени неустановленной природы.

Инфицирование и распространенность

Возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, который был выявлен не так давно, в 1989 г. Ученые еще не успели создать действенную противовирусную вакцину. Поэтому генотип 1б является одним из наиболее устойчивых к лечению.

Его еще называют японским гепатитом, т. к. он широко распространен в юго-восточной Азии, Китае, Японии, на Тайване и Дальнем Востоке. Заражению часто подвергаются туристы, которые приезжают на отдых в Таиланд. В России 53% всех больных гепатитом С заражены генотипом 1b.

Эта инфекция является гемоконтактной, как и другие генотипы гепатита С. Заражение происходит через кровь и другие биологические жидкости инфицированного человека.

Оно может возникнуть при несоблюдении санитарно-гигиенических норм во время осуществления медицинских процедур (переливания крови, инъекций), при проведении стоматологических и косметологических операций.

Если в процессе проведения указанных выше манипуляций произойдет нарушение целостности кожного покрова или слизистой оболочки, то вирус попадет в кровь и быстро разойдется по организму.

В связи с этим в медицинских и других заведениях должны выполняться правила обработки инструментов и работы с биологическими жидкостями.

Другие пути передачи вируса:

• во время полового контакта;
• заражение ребенка от инфицированной матери при родах и грудном вскармливании;
• заражение посредством использования общего шприца (в среде наркоманов).

Такими путями может передаваться любой из видов гепатита С. Источник инфекции – биологические жидкости зараженного человека. Вирус присутствует в крови, в материнском молоке, в вагинальном секрете и сперме. Может также присутствовать в слюне (при высокой вирусной нагрузке), но такие случаи не распространены.

Во время различных бытовых контактов этот вирус не передается (рукопожатия, поцелуи, использование общих предметов быта, посуды, инвентаря или одежды).

Иммунитет

HCV обладает слабой иммуногенностью. В процессе репликации вирусы быстро меняют свою антигенную структуру и начинают воспроизводить себя в несколько измененном антигеном варианте, что позволяет им ускользать от воздействия иммунной системы больного.

После перенесенного заболевания специфическая невосприимчивость при повторных заражениях не проявляется, так больной получает вирусы с мутациями в антигенной структуре.

Рис. 7. Вирус гепатита С поражает клетки печени. В 85% случаев заболевание принимает хроническое течение. На фото цирроз печени.

ССЫЛКИ ПО ТЕМЕ

• Что такое вирион
• Как передается ВИЧ
• Что такое нуклеотид
• Что такое микробиология
• Как лечить гепатит с
• Симптомы гепатита с

Статьи раздела «Гепатит С»

• Как передается гепатит С. Микробиология вируса HCV

Самое популярное

• Все о грибке стопы: симптомы и эффективное лечение современными препаратами
• Грибок кожи головы: как распознать и лечить
• Симптомы и лечение грибка ногтей на руках (онихомикоза)
• Польза и вред кишечной палочки
• Как лечить дисбактериоз и восстановить микрофлору

Статьи раздела «Гепатит С»

• Как передается гепатит С. Микробиология вируса HCV

О микробах и болезнях 2020

Методика проведения качественного ПЦР

Для выполнения качественной полимеразной цепной реакции у пациента берется кровь из вены. Затем проводится лабораторное исследование следующим образом: в исследуемый материал добавляют праймеры (короткие химически синтезированные олигодезоксирибонуклеотиды) или специальные ферменты.

С помощью специального прибора охлаждают и нагревают пробирки с кровью. Создается специальная искусственная среда, в которой размножается генетически материал возбудителя до такой степени, что его можно визуально исследовать. При качественном анализе происходит копирование цепей, которые соответствуют вирусной RNA. Затем делается заключение о наличии вируса гепатита в организме пациента.

Перед проведением качественной ПЦР на гепатит С перед исследованием необходимо:

• Избегать физических нагрузок за день до сдачи анализа.
• Прийти натощак, не употреблять пищу за 8 – 10 часов до сдачи анализа.
• Производить забор крови в первой половине дня.
• За два дня до проведения диагностики исключают жирную, жареную пищу, алкоголь.

Суть качественной полимеразной цепной реакции заключается в многократном увеличении фрагментов вирусных частиц.

Виды анализа на гепатит С методом ПЦР

ПЦР на гепатит С включает в себя три важных составляющих:

• качественный анализ;
• количественный анализ;
• генотипирование.

Эти тесты позволяют определить характер виремии, а также генетические признаки возбудителя. В зависимости от чувствительности диагностической системы, исследование проводится один раз, и иногда для подтверждения или уточнения результатов делается повторный тест с более чувствительным реагентом.

Качественный ПЦР гепатита С

Анализ ПЦР на гепатит С качественный — это другое общее название анализа полимеразной цепной реакции. Стандартная чувствительность теста, позволяющего выявить наличие вирусного поражения, находится в пределах 10-500 МЕ/мл.

Негативный анализ ПЦР на гепатит С показывает, что концентрация вируса в крови пациента находится ниже порога восприимчивости диагностической системы.

Если качественный ПЦР дал ответ «не обнаружено», то для последующего лечения важно узнать порог чувствительности реагента. Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Белковые фракции к флававирусу появляются значительно позже.

Количественный ПЦР гепатита С

ПЦР гепатит С количественный — это показатель вирусной нагрузки, который отображает уровень концентрации РНК флававируса в организме. Это показатель, отображающий, сколько фрагментов вирусной РНК содержится на один кубический сантиметр крови. Результаты ПЦР РНК гепатита С количественного теста в общепринятой системе обозначаются в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) и могут записываться разными способами, например — 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественная ПЦР диагностика гепатита С назначается пациентам перед началом противовирусной терапии, и на 12 неделе лечения, чтобы оценить результаты выбранного метода борьбы с HCV. Вирусная нагрузка позволяет определить три важных показателя заболевания:

• инфекционность, т.е. степень риска передачи вируса от одного носителя к другому (чем выше концентрация РНК флававируса, тем выше вероятность заразить другого человека, например, при половом контакте);
• метод и эффективность лечения;
• длительность и прогноз противовирусной терапии (чем выше вирусная нагрузка, тем дольше длится лечение).

Количественная ПЦР диагностика гепатита С зависит от типа лабораторного теста и порога его чувствительности. Нижней границей нормы принято считать показатель до 600.000 МЕ/мл, среднее значение находится в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и выше считаются высоким уровнем концентрации РНК-содержащего вируса.

Важно: нет прямой связи между уровнем HCV RNA в крови и тяжестью заболевания. У больного может быть очень высокая вирусная нагрузка, но это еще не свидетельствует о том, что имеется серьезное поражение клеток печени.

Генотипирование

Ввиду высокой мутационной активности HCV в природе при тестировании важно выявить, какой именно генотип вируса находится в крови пациента. Всего на планете зафиксировано 11 генотипов вируса гепатита С, в которые входят множество подвидов (субтипов)

На территории РФ распространены 1,2 и 3.

ПЦР РНК гепатита С вместе с генотипированием — очень важная составляющая анализа, т.к. позволяет врачу определить резистентность (устойчивость) вируса, подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения.

Разные генотипы HCV по-разному поддаются противовирусной терапии. Например, 1 генотип требует до 48 недель лечения, а его эффективность в среднем составляет 60%, тогда как 2 и 3 генотипы лечатся в два раза быстрее с эффективностью до 85%.

Генотипирование также позволяет и косвенно определить состояние печени. Например, 3 генотип HCV нередко сопровождается стеатозом, при котором в клетках органа накапливается жир.

Анализ крови на ПЦР при гепатите С должен выдать цифру, определяющую генотип. В лабораторных ответах может быть написано «не типируется» — и это значит, что в крови человека находится вирус, не определяемый тестовой системой. Это может говорить о том, что генотип нехарактерен для данной географической зоны. В этом случае следует повторно сдать анализ с более высокой чувствительностью системы диагностирования.

Виремия. Роль анализа в диагностике инфекции

Чтобы определить степень активности инфекции в организме, применяют метод исследования виремии. На основе такого анализа специалист дает заключение о возможности заражения пациентом окружающих, вступающих с ним в тесный контакт.  Особой значимости набирает этот анализ при опасности передачи инфекции во время беременности от матери к плоду.

Данный тест проходят пациенты, у которых в крови нашлись антитела к инфекции. Примерно четверть больных острым гепатитом С излечиваются самостоятельно, то есть при клинических исследованиях следов вируса не выявляется. По итогам теста врач прогнозирует дальнейшее протекание болезни и назначает соответственное лечение.

Лечебные процедуры  назначаются после проведения исследования ПЦР. Высокие показатели по результатам ПЦР снижают шансы на беспрепятственное восстановление здорового состояния организма, низкие же наоборот – повышают.

Также данный тест проходят пациенты уже параллельно с терапевтическими процедурами: в начале первого месяца, конце первого месяца, в конце квартала и через пол года.

Если уровень заражения с течением времени, а в частности в конце первого квартала лечения, не снижается, значит, лечение малоэффективно. Врачу следует изменить вектор терапии.

Снижение активности заражения определяется понижением в десять раз количеством молекул вируса в крови. То есть если на первой неделе было найдено10000 единиц, а в конце квартала 1000 единиц, инфекция считается угасающей, а лечение стоит продолжать.

Результат теста может быть некорректным из-за присутствия человеческого фактора при исследовании материала. Лаборантом может быть не соблюдены условия содержания опытных проб, например:

• попадание грязи на испытуемую пробу
• присутствие в плазме гепарина
• наличие в плазме специальных веществ, действующих на реагенты, входящие в состав ПЦР.

В дополнение к уровню виремии необходимо идентифицировать генетический тип инфекции, особенно в период назначения и прохождения курса лечения. Стоит понимать, что характер болезни невозможно выявить путем проведения анализа ПЦР. Для этого служат и обязательны к применению другие тесты, такие как биохимический анализ крови (БАК), биопсия печени и так далее.

Терапевтические методы и сроки

Длительность лечения зависит от генотипа. На сегодняшний день известно 11 разновидностей из них 6 встречаются наиболее часто. В России наиболее распространены 1, 2, 3-й тип.

Еще несколько лет назад гепатит C входил в группу неизлечимых заболеваний. Терапия, проводимая преимущественно интерферонами, могла значительно улучшить состояние больного, но не излечить его полностью.

Прорывом в лечении заболевания стал препарат «Софосбувир», который появился в аптеках под другим торговым названием «Совальди». На сегодняшний день имеется несколько аналогов эффективного средства:

• «Виропак»;
• «Гратициано»;
• «Гепцинат»;
• «Гопетавир».

Зачастую они хорошо переносятся больными, но в ряде случаев наблюдаются:

• головная боль;
• тошнота;
• бессонница;
• ухудшение аппетита;
• судороги;
• мигрени;
• депрессии;
• ощущение сухости во рту;
• боль в груди;
• выпадение волос.

Единственный недостаток такого лечения – крайне высокая стоимость (в среднем 10 000-12000 р. за упаковку), которая в зависимости от выбранного медикамента может варьироваться в большую или меньшую сторону.

Что такое вирусный гепатит С?

Вирусный гепатит C, или HCV, это инфекционная болезнь, поражающая печень. Заражение вирусом происходит через кровь. Заразиться можно, делая переливание крови, когда не соблюдаются правила по стерилизации медицинских инструментов. Реже встречаются случаи, когда заболевание получается половым путем или от беременной матери к плоду. Гепатит С бывает 2-х типов.

Хронический гепатит С наиболее опасен. Это форма болезни, которая может длиться на протяжении всей жизни. Она приводит к серьезным проблемам функционирования печени, таким как цирроз либо рак. У 70-90% инфицированных людей болезнь переходит в хроническую стадию.

Важнейшая опасность гепатита С состоит в том, что он протекает скрытно, без желтушных признаков. При этом чаще всего жалуются на поднятие температуры, тошноту и рвоту, физическую слабость, повышенную утомляемость, потерю аппетита и веса. При этом на фоне небольшого уплотнения тканей печени достаточно часто происходит ее злокачественное перерождение. По этой причине вирусный гепатит С зачастую называют «бомбой замедленного действия» или «ласковым убийцей».

Как правило, заразившиеся не ощущают никаких симптомов и не подозревают о своем истинном состоянии. Часто заболевание можно выявить только при обращении к врачу по другому вопросу.

К группе риска относятся:

• дети, получившие вирус гепатита С от матерей;
• наркоманы;
• люди, прокалывавшие части тела или сделавшие татуировки нестерильными инструментами;
• получившие донорскую кровь либо органы (до 1992 года, когда гемодиализ не проводился);
• лица, инфицированные ВИЧ;
• медицинские работники, контактирующие с инфицированными пациентами.

Заключение

Для анализа на ПЦР гепатита С обычно берется венозная кровь. Чаще всего происходит двойной забор биологического материала — для ИФА, и непосредственно для ПЦР теста. Для корректных результатов тестов требуется соблюдение основных правил лабораторного забора биологического материала:

• кровь на анализ сдается в первой половине дня натощак;
• между приемом пищи и забором крови должно пройти не менее 8 часов;
• перед сдачей анализа нужно также исключить алкоголь и жареную пищу;
• в течение суток перед сдачей крови необходимо избегать высоких физических нагрузок.

Результаты тестирования крови обычно готовы на следующий день.